基于两种不同修饰探针构建的产气荚膜梭菌RPA-CRISPR/Cas12a检测方法的流程图

产气荚膜梭菌是一种重要的人畜共患致病菌，可导致多种疾病。产气荚膜梭菌是临床上气性坏疽病原菌中最常见的一种梭菌，也是美国与欧洲食源性疾病中最常见的病原体之一。在动物中，产气荚膜梭菌能够导致反刍动物的出血性肠病综合征和肠毒血症、犬和马的出血性胃肠炎以及家禽的坏死性肠炎。近年来，产气荚膜梭菌引起的麋鹿出血性肠炎已成为麋鹿最重要的疾病之一，这种疾病往往导致麋鹿的猝死，在湖北、北京、河北等地麋鹿种群中短期死亡率大幅提升，严重威胁着重要濒危鹿类的引种、驯养、繁殖及野化放归。而快速准确的产气荚膜梭菌检测方法对预防和控制致病菌引起的疾病和死亡至关重要。

麋鹿中心张庆勋博士团队，基于RPA方法与CRISPR/Cas12a系统联用开发了两种快速、灵敏、无需特殊仪器的产气荚膜梭菌新型检测方法：RPA-CRISPR-Cas12a-FL和RPA-CRISPR-Cas12a-LFS（图1），两种方法分别依赖于免疫荧光信号及侧流试纸条，均能实现对检测结果的可视化读取。RPA-CRISPR-Cas12a-FL和RPA-CRISPR-Cas12a-LFS方法可在1小时内检测低至2拷贝和20拷贝的细菌基因，并且与qPCR测定法具有良好的一致性。这两种方法能够将产气荚膜梭菌与其他致病菌区别开，且没有任何交叉反应性，具有良好的特异性。为了验证上述方法的诊断准确性，研究人员对麋鹿临床样品以及人类血液和粪便样品进行检测，两种方法与qPCR方法显示出100％的一致性。这些结果表明，RPA-CRISPR-Cas12a-FL和RPA-CRISPR-Cas12a-LFS方法具有良好的可行性、灵敏度、特异性和实用性，是一种有前景的产气荚膜梭菌检测方法。

该成果已发表于农林科学/传染病学领域知名期刊Transboundary and Emerging Diseases，并申请国家发明专利1项，研究工作得到了富联注册院萌芽计划、创新培育等项目支持。

(北京麋鹿生态实验中心 文/图)